假升麻AruncussylvesterKostel.是蔷薇科（Rosaceae）绣线菊亚科假升麻属AruncusAdans.多年生草本植物[1]。假升麻的根称为金毛三七，是“陕西七药”之一，具有舒筋、活络、止痛等功效，主治损伤或劳伤筋骨痛[2]。据文献报道[3-6]假升麻属化学成分主要为苯丙素类、酚酸类和单萜类，现代研究[6-9]表明假升麻的根具有良好的抑菌效果和较强的抗氧化作用，且微量元素的量较高，但目前对于假升麻的化学成分研究较少。因此本实验对假升麻干燥根的乙醇提取物进行了化学成分研究，从中分离得到2个单萜苷类化合物，分别鉴定为(2E,4S,5R)-4-hydroxy-3-[2-(β-D-glucopyranosyloxy)ethylidene]-5-(2-methylprop-1-en-1-yl)dihydrofuran-2(3H)-one（1）、(2Z,4S,5R)-4-hydroxy-3-[2-(β-D-glucopyranosyloxy)-ethylidene]-5-(2-methylprop-1-en-1-yl)dihydrofuran-2(3H)-one（2）。化合物1和2均为新化合物，分别命名为假升麻苷A和假升麻苷B。结构见图1。
1仪器与材料
BrukerTensor27红外光谱仪、BrukerAvanceDRX-型核磁共振谱仪、BrukermicrQ-TOF-QII高分辨率质谱仪（德国Bruker公司）；D大孔吸附树脂为天津市海光化工有限公司产品；薄层色谱硅胶（GF，10～40μm）和柱色谱硅胶（～目和～目）为青岛海洋化工厂产品；ZORBAXSB-C18制备柱（mm×21.2mm，7μm），ZORBAXSB-C18分析柱（mm×4.6mm，5μm）为美国安捷伦公司产品；色谱甲醇购自天津市康科德科技有限公司；其他试剂均为分析纯。
假升麻药材于年6～8月采于陕西省眉县，由西北农林科技大学的吴振海教授鉴定为假升麻AruncussylvesterKostel.的根，标本（S202）保存在天津大学药物科学与技术学院天然药物化学实验室。
2提取与分离
假升麻根23.3kg，人工粉碎成细小块状，用95%乙醇冷浸1周，95%乙醇回流提取2次（每次2h），60%乙醇回流提取1次（每次2h），合并浓缩提取液，得浸膏3.2kg，加6L蒸馏水混悬，然后依次用等体积石油醚、醋酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到正丁醇萃取部分g。正丁醇萃取部分再经D大孔吸附树脂柱色谱进行分离，以乙醇-水（0∶→30∶70→50∶50→70∶30→90∶10）梯度洗脱，共得到水部分71g、30%乙醇洗脱部分87g、50%乙醇洗脱部分31g、70%乙醇洗脱部分5g、90%乙醇洗脱部分1g。
30%乙醇洗脱部分87g，经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇（9∶1→85∶15→8∶2→6∶4）梯度洗脱，共得到50个组分（Fr.1～50）。通过硅胶TLC检识，合并Fr.19～25（7g）经硅胶柱色谱分离，醋酸乙酯-甲醇（∶1→98∶2）梯度洗脱，共得到29个组分（Subfr.1～29）。其中Subfr.19（mg）用制备HPLC进行制备分离，20%甲醇-水等度洗脱，得化合物1（50mg）和2（mg）。
3结构鉴定
化合物1：白色无定形粉末，易溶于甲醇，难溶于二氯甲烷。[α]25D+5°(c0.4,MeOH)。HR-ESI-MSm/z:.[M＋Na]+（计算值.[M＋Na]+），确定化合物1分子式为C16H24O9。(cm?1):和，表明分子中含有羟基和羰基官能团。
1H-NMR（表1）中δ1.80(3H,brs)和1.81(3H,brs)表明有2个甲基存在，δ4.37(1H,d,J=7.8Hz)为典型的β-D-葡萄糖端基氢信号。13C-NMR（表1）中有16个碳的信号，包括6个糖上的碳信号δ.1,78.1,78.0,75.0,71.5,62.7，剩余10个碳信号，推测为单萜结构片段，包括1个羰基碳δ.6和4个烯碳δ.4,.7,.1,.2。综合1H-NMR和13C-NMR可以判断其为单萜苷类化合物。发现其结构信息与化合物kodemariosideC[10]结构片段相似（化合物1无E-p-coumaroyl取代基）。在HMBC（图2）谱中，羰基碳信号δ.6与δ6.97(1H,dt,J=1.4,5.3Hz,H-2)和5.01(1H,dd,J=3.0,9.2Hz,H-5)均相关，可以判断存在γ-内酯环。糖的端基氢δ4.37(1H,d,J=7.8Hz,H-1′)与δ67.0(C-1)相关，证明糖的端基碳连在1位碳原子上。
根据NOESY谱，可以确定该化合物的相对构型。首先，在NOESY（图2）谱中，δ4.61(1H,dd,J=5.1,15.8Hz,H-1)与δ4.74(1H,overlapped,H-4)有NOE相关，因此确定2位、3位双键的构型为E式。此外，δ4.74(1H,overlapped,H-4)与δ5.15(1H,brd,J=9.2Hz,H-6)有NOE相关，所以判断4位和5位氢在异侧。因此其绝对构型有2种可能(4S,5R)或(4R,5S)。为确定其绝对构型，先测化合物1的ECD谱，然后利用计算化学的方法，首先在力场MMFF94中对化合物1进行构象搜索分析，共得到19种构象（范围为3kcal/mol），构型优化以及频率计算的结果显示，这19种构象在甲醇中均是稳定构象，其中有15种构象的量大于0.1%。采用在甲醇中B3LYP/6-31g(d)基组水平的构象，逐个计算在cam-B3LYP/6-31g(d)基组水平的35个激发态。峰展宽为0.4eV，得到这些构象的ECD图谱，经玻尔兹曼分布权重加合主要构象的图谱，得到化合物1的ECD图谱，结果见图3。其中1a的构型为4R5S，1b的构型为4S5R。观察图3可以发现化合物1的实测ECD谱与1b的ECD谱十分吻合，因此证明化合物1的绝对构型为4S5R，确定其结构如图1。综上所述，化合物1的结构鉴定为(2E,4S,5R)-4-hydroxy-3-[2-(β-D-glucopyranosyloxy)-ethylidene]-5-(2-methylprop-1-en-1-yl)dihydrofuran-2(3H)-one，为新化合物，命名为假升麻苷A。
化合物2：白色无定形粉末，易溶于甲醇，难溶于二氯甲烷。[α]25D+7.8°(c0.23,MeOH)。HR-ESI-MSm/z:.[M＋Na]+（计算值.[M＋Na]+），确定化合物2分子式为C16H24O9。(cm?1):和，表明分子中含有羟基和羰基官能团。
化合物2的1H-和13C-NMR（表1）波谱数据与化合物1十分相近，1H-NMR中只有1位，2位氢的化学位移有明显变化，1位氢信号由原来的δ4.73，4.61向低场移动变为δ4.99，4.84，2位氢信号由原来的δ6.97变为δ6.66（表1），推测这种变化的原因可能是化合物1和2的双键构型不同，化合物1中H-2和化合物2中H-1的化学位移值受到内酯环羰基的去屏蔽作用而向低场移动。且在NOESY谱中δ6.66(1H,dt,J=1.9,5.7Hz,H-2)与δ4.74(1H,m,H-4)有NOE相关，确证化合物2双键为Z式。因此化合物2的结构鉴定为(2Z,4S,5R)-4-hydroxy-3-[2-(β-D-glucopyranosyloxy)ethylidene]-5-(2-methylprop-1-en-1-yl)dihydrofuran-2(3H)-one（图1），为新化合物，命名为假升麻苷B。
4讨论
化合物1和2为同分异构体，两者的区别是2、3位双键的构型不同。1和2两个化合物与文献报道[11]中化合物aruncideD[(Z)-4-hydroxy-3-(2-β-D-glucopyranosyloxyethylidene)-5-(2-methylprop-1-en-1-yl)dihydrofuran-2(3H)-one]结构相似，但aruncideD的4位和5位碳绝对构型没有确定，且该文献作者参考化合物cimicifugolideA[12]（aruncideD的苷元，2、3位双键为E式）确定aruncideD双键的构型为Z式，经仔细对比化合物1和2以及aruncideD的波谱数据与旋光值，发现aruncideD与化合物1的氢、碳谱数据及旋光值基本一致，因此笔者认为aruncideD的结构鉴定不完全，且双键构型鉴定错误，其结构应该与化合物1相同。
参考文献（略）
来源：马雪姣，栗章彭，苏艳芳.假升麻中2个新的单萜苷类化合物[J].中草药,,49(2):-.
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