中医药治疗脱发由来已久，桑柏生发方根据著名中医专家吴考槃教授70余年临证经验，针对脱发而拟定，临床治疗脱发较好疗效，同时前期研究也已证实该方在体外能显著抑制多种微生物生长繁殖，但尚缺乏实验室数据揭示桑柏生发方治疗脱发调控毛囊周期，刺激毛发再生的机制。
本实验以细胞实验为主，以毛囊根部人毛乳头细胞为研究对象，旨在临床观察和血清细胞因子实验基础上，从分子生物学水平揭示桑柏生发方对毛发再生过程中VEGF等细胞因子的影响。
建立毛乳头细胞培养体系
体外分离的新鲜毛乳头接种于DMEM培养液中，37℃、5%CO2条件下培养，一般可见24h后毛乳头贴壁，待贴壁完全后毛乳头细胞逐渐迁出，细胞形态为三角梭形，沿放射线生长，3周左右细胞逐渐密集生长，呈类似成纤维细胞形态的细长梭形，具备毛乳头细胞凝集性生长特性。（见图1）
水提液、醇提液作用细胞最佳有效浓度根据MTT检测结果，μL培养体系中加入1μL桑柏生发方水提液时最有效刺激细胞增长，即水提液浓度为mg·L-1时细胞增殖能力最高，相同培养体系加入2μL桑柏生发方醇提液时最有效刺激细胞增长，即醇提液浓度为mg·L-1时细胞增殖能力最高。（见图2）
桑柏生发方对细胞上清液中的VEGF、IL-1、TNF-α水平的影响与空白对照组比较，桑柏生发方水提组与醇提组均能显著刺激人毛乳头细胞分泌血管内皮生长因子VEGF，抑制细胞分泌IL-1，刺激细胞分泌TNF-α，差异均有统计学意义（P0.05或P＜0.01）；与米诺地尔组比较，水提组和醇提组作用与其相当，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（见表1～3）
桑柏生发方不同制剂对人毛乳头细胞内VEGF、IL-1β及TNF-αmRNA表达的影响⑴RT-PCR检测结果显示醇提液组VEGFmRNA表达量显著高于空白对照组与米诺地尔组（P＜0.01），水提液组VEGFm－RNA表达量与米诺地尔组作用相当。（见表4）
⑵米诺地尔组、水提液组、醇提液组IL-1βmRNA的表达均明显低于空白对照组，差异均有统计学意义（P＜0.01）；米诺地尔组IL-1βmRNA的表达低于空白对照组、水提液组及醇提液组，差异有统计学意义（P＜0.01）。（见表5）
⑶醇提液组TNF-αmRNA的表达明显高于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），水提液组TNF-αmRNA表达与空白对照组比较，差异无统计学意义
（P＞0.05），水提液组、醇提液组与米诺地尔组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（见表6）
桑柏生发方由冬桑叶、蔓荆子、苦参、黄柏皮、升麻、野菊花等组成，方中冬桑叶苦甘寒，疏散风热，凉血长发。黄柏苦寒清热泻火，燥湿止痒杀虫。升麻取其轻浮升散，轻透一身之郁热。蔓荆子辛苦寒，疏散风热，清利头目能长发。野菊花苦、辛，微寒，清热解毒。诸药合用，具有散热凉血，祛风杀虫，止痒消脂，生发乌发作用。
本实验以人毛乳头细胞为研究对象，选用桑柏生发方水提液与外用醇提液来刺激体外培养的毛乳头细胞，位于毛囊基底部的特殊间质成分毛乳头细胞在毛囊发育和周期性生长调控中常起主导作用，而镜下观察脱落毛发毛囊形态时发现毛囊细小萎缩，分离得到的毛乳头细胞生长缓慢，凋亡加速，究其机制可知毛乳头细胞在调节毛囊生长过程中可能是通过分泌多种细胞因子而发挥作用，生物特性在体内外表现为凝集性生长并具有诱导毛囊形成的能力。张国强等研究发现，血管内皮生长因子（VEGF）作为毛乳头细胞的自分泌因子能显著促进体外培养的细胞增殖。
本实验研究结果提示，桑柏生发方水提液药物组、醇提液组能显著促进毛乳头细胞增殖并刺激分泌血管内皮生长因子，促进毛囊周围毛细血管的生长，从而达到营养已闭合的毛囊血管的目的，以治疗毛发脱落并促进毛发新生。有研究发现，在毛囊培养中显示IL-1β是一个有效的毛发生长抑制剂，可能是通过旁分泌的方式来造成头皮局部毛囊炎症的产生，导致免疫系统对局部毛囊产生免疫抑制，同时也抑制了毛乳头细胞的正常生长。本实验结果显示桑柏生发方制剂能明显抑制毛乳头细胞分泌IL-1β，可能是通过避免干扰毛发正常生长周期所导致的脱发，从而达到治疗脱发的目的。
有研究显示，TNF-α具有保护头皮细胞的作用，本实验结果表明，桑柏生发方能刺激细胞分泌TNF-α并促进其mRNA的高表达，提示桑柏生发方可能是通过生理范围内的TNF-α分泌刺激人毛乳头细胞增殖分化，促进毛发生长。桑柏生发方促毛发生长作用可能是通过这些细胞因子来调整脱发局部的免疫效应，同时协调调控毛囊周期，使得退行期毛囊重新进入生长期，阻止毛发的进行性脱落并促进新生毛发的生长，桑柏生发方临床效果较佳。
本文来源于《中国药导报》
年8月第22卷第15期
